Im Detail
Funktionsprinzip
Im Flüssigchromatographen werden die Bestandteile einer Probe nach ihrer Wechselwirkung mit der Trennsäule zeitlich getrennt. Die getrennten Stoffe werden ionisiert und gelangen in das Massenspektrometer. Beim Triple-Quadrupol wählt der erste Massenfilter das Ion des Zielstoffs aus, in einer Kollisionszelle wird es fragmentiert, und der zweite Massenfilter lässt nur ein bestimmtes Fragment passieren. Dieses Verfahren heißt Multiple Reaction Monitoring (MRM). Die Kombination aus Retentionszeit und Massenübergang macht die Messung sehr selektiv.
Einsatz in der Arzneimittelprüfung
Spurenverunreinigungen, die mit UV-Detektion nicht ausreichend empfindlich oder selektiv erfasst werden.
Nitrosamine: Die EMA verlangt für ihre Bestimmung massenselektive Verfahren wie MS/MS oder hochauflösende Massenspektrometrie, weil koeluierende Stoffe sonst Fehlbefunde verursachen können. Als Beispiel nennt sie DMF, das zusammen mit NDMA eluieren kann.
Quantitative Bestimmungen in komplexen Matrices, wenn andere Verfahren an Grenzen stoßen.
Validierung nach ICH Q2(R2)
ICH Q2(R2) führt die quantitative LC/MS-Analyse von Spurenverunreinigungen als eigenes Beispiel. Die Spezifität kann dort technologisch begründet werden, etwa über den MRM-Übergang mit festgelegtem Verhältnis von Quantifier- zu Qualifier-Ion zusammen mit der Retentionszeit. Für die Präzision nennt die Leitlinie mindestens drei Wiederholungen auf mindestens drei Dotierstufen oder sechs Wiederholungen bei 100 Prozent, für die Linearität mindestens fünf Konzentrationsstufen. Die Zwischenpräzision wird im selben Labor unter wechselnden Bedingungen geprüft, etwa mit anderen LC/MS-Systemen, anderen Analytikern oder an anderen Tagen. Die Bestimmungsgrenze ist die niedrigste Dotierstufe mit akzeptabler Richtigkeit und Präzision.
Typische Fallstricke
Bei Spurenanalytik können Verunreinigungen aus Wasser, Laborluft, Handschuhen, Membranen oder Lösungsmitteln Fehlbefunde verursachen, und Nitrosamine können sich während der Analyse erst bilden. Die EMA empfiehlt deshalb Kontrollversuche, etwa mit einem orthogonalen Verfahren.
In der Praxis bei A&O Pharma
In unserem GMP-zertifizierten Labor in Itzehoe setzen wir für Spurenanalytik ein Triple-Quadrupol-LC-MS/MS ein. Die zugehörige analytische Methodenvalidierung gehört zu unserer GMP-Dienstleistung, sodass Messung und Validierung aus einer Hand kommen können.
Analytische DienstleistungenHäufige Fragen
Was ist der Unterschied zwischen LC-MS und LC-MS/MS?
Bei LC-MS wird das Ion des Stoffs nach einer Massenstufe gemessen. Bei LC-MS/MS folgt eine Fragmentierung und eine zweite Massenstufe, was die Selektivität deutlich erhöht und Störungen durch Begleitstoffe verringert.
Warum wird LC-MS/MS für Nitrosamine eingesetzt?
Nitrosamine müssen in sehr niedrigen Konzentrationen bestimmt werden. Die EMA verlangt dafür massenselektive Verfahren wie MS/MS oder hochauflösende Massenspektrometrie, um Fehlbefunde durch koeluierende Stoffe zu vermeiden.
Wie wird eine LC-MS/MS-Methode validiert?
Nach ICH Q2(R2), die die quantitative LC/MS-Analyse von Spurenverunreinigungen als eigenes Beispiel enthält. Geprüft werden unter anderem Spezifität, Präzision, Richtigkeit, Linearität und die Bestimmungsgrenze.
